Fråga:
Vad är dubbletter i encells-RNA-seq-data?
gc5
2017-12-28 04:13:33 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Jag läser The Tabula Muris Consortium et al. (pp).

I vissa organ uteslöts också celler med mer än 2 miljoner läsningar som en konservativ åtgärd för att undvika dubbletter.

Hur definieras en "dubblett" exakt? Till exempel, är dubblett en uppsättning celler sekvenserade som en enda cell (och så är antalet transkriptioner dubbelt)?

Vill du förklara downvotes?
Jag har inte nedröstat dig men den här frågan (enligt min smak) visar inte ** någon forskningsinsats, jag tror att den här typen av nedröstningar kan förhindras genom att visa en ansträngning för att lösa frågan själv, till exempel visa vilken artiklar har du läst om dubbletter (om de finns) eller vilken typ av sökning du har gjort för att hitta mer information, även om den inte lyckas.
Två svar:
gringer
2017-12-28 04:28:19 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Är dubblett en uppsättning celler sekvenserade som en enda cell?

Ja. Beroende på metoden för enstaka cellsekvensering kan det vara mer eller mindre troligt att grupper av celler fångas och streckkodas med samma "unika" streckkod. Detta är mer troligt i split-pool RNA-sekvensering (t.ex. SPLiT-seq), och mindre troligt i cell-capture-RNA-sekvensering (t.ex. Fluidigm C1). Dubletter kan också skapas genom fysiska / experimentella processer (t.ex. från vävnader som inte helt dissocierades).

Tänk på att detektering av dubletter inte är så enkelt som att räkna för fördubbling av transkriptionsuttryck, eftersom uttrycket profilerar är olika i olika celler. Det är därför som encellssekvensering är användbart i första hand.

"Mindre troligt i cellfångande RNA-sekvensering" - Förutom att C1 brukade ha en ökänd fel som förstörde dess dubblettdetektering när de z-staplades.
stemgal
2017-12-29 18:35:24 UTC
view on stackexchange narkive permalink

"Doublet" används ofta för att beskriva en droppe i droppbaserad sekvensering som har fångat minst 2 celler. 10x anger att deras dubblett är 0,8% per 1000 celler:

enter image description here

Det finns en avvägning mellan riktade cellupptagning och dublettfrekvens och laboratorieprotokoll är vanligtvis optimerade för en viss förväntad dublettfrekvens.

Man kan förvänta sig att se nästan en fördubbling av transkriptioner, men det är inte trivialt att härleda detta beräkningsmässigt.



Denna fråga och svar översattes automatiskt från det engelska språket.Det ursprungliga innehållet finns tillgängligt på stackexchange, vilket vi tackar för cc by-sa 3.0-licensen som det distribueras under.
Loading...